ترایزول چیست؟
یک معرف سریع و راحت برای استفاده در جداسازی و خالص سازی هم‌زمان RNA ، DNA و پروتئین از طیف گسترده ای از نمونه ها میباشد. یک جداسازی فاز مایع یک مرحله‌ای مناسب برای جداسازی هم‌زمان RNA ، DNA و پروتئین است.
ترایزول، مخلوطی از گوانیدین تیوسیانات و فنل در یک محلول تک فاز است که به‌طور مؤثر DNA ، RNA و پروتئین را در هموژناسیون یا لیز نمونه بافت حل می‌کند. پس از افزودن کلروفرم یا 1-برومو-3-کلروپروپان و سانتریفیوژ، این مخلوط به 3 فاز جدا می شود:
یک فاز آبی حاوی RNA ، فاز آبی حاوی DNA و یک فاز آلی حاوی پروتئین‌ها.
ترایزول یا TRIzol یکی از مؤثرترین روش‌ها برای جداسازی RNA توتال از بافت یا سلول است .این روش برای جداسازی مولکول‌های RNA در با سایزهای مختلف از 0.1-15 کیلو باز بسیار مؤثر است. RNA حاصل با DNA و پروتئین آلودگی کم یا بدون آلودگی است.
این RNA می‌تواند برای تکنیک نوردرن بلات Northern Blotting، جداسازی mRNA، ترجمه در شرایط آزمایشگاهی in vitro، سنجش محافظت RNase، کلونینگ و واکنش زنجیره‌ای پلیمراز (PCR) استفاده شود.
استخراج دستی RNA با ترایزول ویژگی و مزایا این روش چیست؟کاربرد آسان: یک معرف تک محلولی است که می‌تواند برای جداسازی RNA ، DNA و پروتئین استفاده شود و عاری از هرگونه آلودگی باشد.
چندمنظوره: ترایزول یا معرف TRI با مقدار کم یا زیاد بافت یا سلول عملکرد خوبی دارد و می‌توان RNA ، DNA و پروتئین به‌طور هم‌زمان از بسیاری نمونه‌های انسانی، گیاهی، مخمری، باکتریایی یا ویروسی استخراج کرد.
کارآمد: معرف TRI عملکرد بهتری نسبت به روش‌های سنتی تیوسیانات گوانیدین/کلرید سزیم دارد. کل روند استخراج RNA از بافت یا سلول‌های در کمتر از 3 ساعت انجام شود.
معایب:
۱-مراحل کار نسبتا طولانی
۲-بوی ترایزول و کلروفرم اذیت کننده میباشد. و هردو بسیار سمی میباشند.
۳-کیفیت ترایزول و مواد مصرفی برای استخراج بسیار مهم است.
دمای نگه‌داری میان مدت دمای 4 درجه سانتی‌گرادطولانی مدت فریزر -20
پروتکل ترایزول براساس شرکت ترموفیشر:
1 -میلی لیتر محلول ترایزول سرد یخ را به نمونه اضافه کنید.2- ورتکس 5-10 ثانیه. و به مدت 5 دقیقه در دمای اتاق انکوبه کنید.3-به نمونه 200 میکرولیتر کلروفرم اضافه کنید.4-به مدت 15 ثانیه خوب مخلوط کنید. با تکان دادن (ورتکس نکنید).5- روی یخ یا 4 درجه سانتیگراد به مدت 5 دقیقه انکوبه کنید.6-سانتریفیوژ در 12000rpm در 4 سانتی گراد به مدت 15 دقیقه.
7-فاز آبی را به لوله جدید 1.5 میلی لیتری بدون RNase منتقل کنید (فاز میانی را مخلوط نکنید) و حجم مساوی ایزوپروپانول را اضافه کنید.8-به آرامی مخلوط کرده و به مدت 15 دقیقه روی یخ قرار دهید.9-مخلوط را در 12000rpm در دمای 4 درجه سانتی گراد به مدت 15 دقیقه سانتریفیوژ کنید.
10-مایع رویی را دور بیندازید و 1 میلی لیتر اتانول 75 درصد اضافه کنید، به طور کم ورتکس کنید تا پلت از جای خود خارج شود و سپس در دمای 4 درجه سانتی گراد به مدت 8 دقیقه در 7500rpm سانتریفیوژ کنید.11-مایع رویی را دور بیندازید و بگذارید پلت برای چند دقیقه در دمای اتاق خشک شود (اجازه ندهید کاملاً خشک شود.12-پلت را در 50 میکرولیتر آب DEPC حل کنید. برای کمک به حل شدن، لوله را به مدت 10 دقیقه در حمام آب 60-55 درجه سانتیگراد قرار دهید.
حداقل نمونه اولیه در استخراج با ترایزول:
کشت سلولی: تا 10^7×1 سلول بسته به رده سلولی.- سلول های باکتریایی: تا 1×10^7 سلول- بافت: 30-50 میلی گرم.- سلول مخمر: 5×10^7 سلول- قارچ های گیاهی و رشته ای: تا 100 میلی گرم.- مواد مایع مانند سرم: 100μl- خون کامل: حداقل 500 میکرولیتر (تا 2 میلی لیتر)
در مورد خون کامل استخراج WBC به ۲ روش لایزز بافر RBC و فایکول انجام میشود که در بخش های بعدی مفصل توضیح داده میشود.
لیستی از شرکت های تولید کننده ترایزول در ایران:
پیشنهاد بازارلب: شرکت یکتا تجهیز و سیناکلون
- سیناکلون
- یکتاتجهیز
- کیاژن فناوران
- دنازیست
- کالازیست
- بهژن
ترابل شوتینگ استفاده از ترایزول:
